技术概况：控制农产品中农药残留的关键环节之一就是要利用蔬菜农药残留快速检测技术，对农产品中农药残留量及时、准确的分析检测，将对政府部门决策提供科学依据。目前广泛使用农药残留检测方法主要有色谱检测法和速侧仪法。速测仪法因其成本低、快速、简便、能够检测大批量样本、对于检测人员的技术水平要求不高以及适宜推广于基层技术人员等特点。成为国内应用最为广泛的农药残留快速检测方法，主要用于蔬菜、水果生产基地和批发市场中产品有机磷和氨基甲酸酯类农药残留超标情况的快速检测。

技术要点：

1、仪器设备：RP-410型农药残留速测仪

2、试剂及准备

（1）缓冲液：取一包一定比例的磷酸氢二钠+磷酸二氢钾，加1000毫升蒸馏水溶解，调pH至8。

（2）酶：加3毫升缓冲液，放入冰块，保持低温，维持酶活性。

（3）显色剂：加10毫升缓冲液溶解备用。

（4）底物：加10毫升缓冲液溶解备用。

3、样品前处理方法

（1）取样：选取表面干净的待检蔬菜，叶菜类用取样器随机取不同植株的叶片，果瓜菜类用取样器沿皮取约1厘米的样品。叶菜类取材2克，非叶菜类取4克。

（2）提取：将所取蔬菜样品切碎放入提取瓶中，加入20毫升提取试剂，震荡１~2分钟，倒出上清液，静置3~5分钟，即为样品提取液。倒出上清液时，最好倒入口径较小的试管中，这样便于下一步移液操作。往试管里倒上清液时，尤其是叶菜类样品，要格外小心，尽量不要把碎叶片倒出，否则，将堵塞移液枪的管嘴，处理时相当困难。

（3）培养：取5只平底小试管，1支为空白对照，依次加入50µL酶，3毫升提取试剂，50微升L显色剂；其他4支为样品，分别依次加入50微升酶，3毫升样品提取试液，50µL显色剂，在37~38℃下培养30分钟。首先，要注意保持酶、提取试剂（样品提取液）、显色剂时间上的一致性，要迅速地将样品分别加入5支平底小试管中，然后将50微升酶和3毫升提取试剂分别加入5支平底小试管中，最后将显色剂分别加入5支平底小试管中；其次，培养温度要严格控制在37℃-38℃之间，培养过程中温度发生变化，超出范围，直接影响测定结果，温度低于37℃，抑制率偏低，温度高于38℃，抑制率偏高。培养时间要严格控制为30分钟，时间少于30分钟，抑制率偏低，时间多于30分钟，抑制率偏高。

（4）结果检测与分析

将培养后的5支平底小试管内分别加入50微升底物，然后迅速倒入比色杯内，放入RP-410中进行检测，如动作缓慢将会导致抑制率偏高。空白试管对应的比色杯要放在仪器的最外一格中，否则，检测结果无效。比色杯放入后，要按空白键，若按了样品键，检测结果亦无效。RP-410每次可检测5个样品，若检测多个样品时，可继续检测，不必再设空白对照，5个样品为一组。

检测完毕，仪器将自动打印出检测结果，即每个样品的抑制率。抑制率<70%，样品合格；抑制率≥70%，样品不合格。若抑制率≥70%的样品，蔬菜中可能含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，此时样品要有两次以上重复试验，几次重复检测的重现性应在80%以上，才能判定此样品是否合格。抑制率在-10%~70%之间，均属正常，一旦抑制率超出此范围，则表示操作失误，需重新检测。

注意事项：

1、该方法适用于新鲜蔬菜和水果上的农残留快速检测，但部分含特殊物质的蔬菜如大葱、大蒜、韭菜等以及一些菌类如蘑菇等，易得出现假阳性结果。对含残留量愈高的蔬菜，测定的误差愈大。不适合用茶叶等干性物质的样品的检测。

2、该方法只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，不适用于其他农药残留检测，且只能定性。所以，当用此方法检测有残留问题的蔬菜时，如果要作为仲裁处理，应送到有关部门进一步用气相色谱等仪器进行定性和定量分析，其结果方可作为最终结论性数据。

3、在有机磷和氨基甲酸酯类农药中，也有少部分农药品种对此方法不够灵敏（检出浓度大于30mg/kg）。此酶对以下农药不敏感：甲基对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、毒死蜱、乐果等。

适宜区域：本方法适用于除葱姜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇等以外的叶菜类、果菜类、豆类、瓜菜类蔬菜中，有机磷类和氨基甲酸酯类农药的定性检测。

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